現代生物化學實驗教程 - 城邦阅读花园






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	目錄　　第一章生物化學實驗基礎知識 001 第一節生物化學實驗技術發展概況 001 第二節生物化學實驗室常識介紹 003 一、實驗室規則 003 二、實驗記錄與實驗報告 004 三、實驗室安全措施及注意事項 005 四、實驗室基本操作 007 五、試劑的分級和特殊試劑的保存 012 第二章現代生物化學實驗技術 013 第一節離心分離技術 013 一、離心力的計算 013 二、沉降速度 013 三、沉降係數 014 四、沉降時間 015 五、離心分離的方法 015 六、離心機的類型及使用 016 七、安全措施 017 第二節電泳技術 017 一、電泳的基本原理 017 二、區帶電泳的分類 019 三、電泳技術的應用 020 第三節分光光度技術 026 一、溶液的顏色與光吸收的關係 026 二、吸光度與透光度 026 三、Lambert-Beer定律 027 四、偏離Lambert-Beer定律的產生因素 027 五、可見光及紫外光分光光度法 027 六、分光光度計 028 第四節色譜技術 029 一、色譜技術的基本理論 029 二、吸附色譜 031 三、分配色譜 035 四、離子交換色譜 036 五、凝膠色譜法 039 六、親和色譜 042 第五節聚合酶鏈式反應（PCR）技術 044 一、PCR反應的基本原理 044 二、PCR反應的基本步驟 046 三、PCR技術的發展與應用 046 第三章基礎性實驗 049 第一節糖生物化學實驗 049 實驗一糖的還原性檢驗 049 實驗二總糖和還原糖的測定 051 Ⅰ Fehling試劑熱滴定法 051 Ⅱ 3, 5-二硝基水楊酸比色定糖法測定還原糖和總糖 054 第二節脂類化學實驗 057 實驗一脂肪碘值的測定 057 實驗二粗脂肪含量的測定—索氏抽提法 060 第三節蛋白質化學實驗 062 實驗一蛋白質的呈色反應和沉澱反應 062 Ⅰ 蛋白質（多肽）的呈色反應（雙縮脲反應） 062 Ⅱ 蛋白質的呈色反應（茚三酮反應） 063 Ⅲ 蛋白質的沉澱反應 065 實驗二蛋白質含量測定 067 Ⅰ 紫外吸收法測定蛋白質含量 067 Ⅱ 考馬斯亮藍染色法測定蛋白質含量 068 Ⅲ 雙縮脲法測定蛋白質濃度 070 Ⅳ Folin-酚試劑法（Lowry法）測定蛋白質含量 072 實驗三牛乳中蛋白質的分離和提取 074 實驗四氨基酸的分離鑒定（紙色譜法） 076 實驗五血清蛋白的醋酸纖維薄膜電泳 077 第四節核酸化學實驗 080 實驗一核酸含量的測定 080 Ⅰ 紫外分光光度法測定核酸的含量 080 Ⅱ 二苯胺法測定DNA含量 082 實驗二酵母核糖核酸的分離及組分鑒定 083 實驗三三種腺苷酸的分離 085 Ⅰ DEAE-纖維素薄層色譜分離鑒定AMP、ADP和ATP 085 Ⅱ 醋酸纖維素薄膜電泳分離鑒定三種腺苷酸 088 第五節酶學實驗 090 實驗一酶的特性—底物專一性 090 第六節維生素實驗 092 實驗一維生素A的含量測定（比色法） 092 第四章綜合性實驗 095 第一節糖化學實驗 095 實驗一天然產物中多糖的分離、純化與鑒定 095 Ⅰ 多糖的提取、純化 095 Ⅱ 多糖的鑒定 097 第二節蛋白質化學實驗 099 實驗一總氮量的測定（微量凱氏定氮法） 099 實驗二聚丙烯醯胺凝膠電泳分離血清蛋白 105 第三節核酸化學實驗 109 實驗一動物肝臟DNA的提取及含量測定 109 實驗二 DNA的定量測定（二苯胺法） 111 第四節酶學實驗 112 實驗一大蒜細胞SOD的提取與分離 112 實驗二過氧化物酶活力的測定 114 實驗三乳酸脫氫酶活力測定 116 實驗四小麥萌發前後澱粉酶活力的比較 118 實驗五胰蛋白酶的製備及酶活力的測定 121 實驗六蛋白水解酶活力的測定 125 第五節新陳代謝實驗 129 實驗一肌糖原的酵解作用 129 實驗二脂肪酸β-氧化 132 第六節分子生物學實驗 134 實驗一生物基因組DNA的提取 134 實驗二生物基因組DNA的檢測 137 實驗三質粒DNA的提取 138 實驗四 DNA的PCR擴增 140 實驗五 DNA瓊脂糖凝膠電泳 143 實驗六從瓊脂糖凝膠中回收DN 段 145 實驗七限制性核酸內切酶消化、連接與TA克隆 147 第五章設計性實驗 151 實驗設計一植物總黃酮的提取和測定 152 實驗設計二鹼性過硫酸鉀氧化—紫外分光光度法測總氮 153 實驗設計三酶促反應的影響因素 153 實驗設計四核酸的提取及性質鑒定 154 實驗設計五果蔬維生素C的定量測定 155 實驗設計六水中常見細菌的快速生化檢測 155 第六章雙語教學選開實驗 157 Experiment 1 Kit for assaying blood glucose (for hand and automatic analyzer) 157 Experiment 2 Determination of isoelectric point of protein—precipitation method 159 Experiment 3 Experiments of enzyme kinetics 161 Ⅰ. Effects of substrates concentration of enzyme activity: determination of Km of alkaline phosphatase 161 Ⅱ. Effects of inhibitors on the velocities of enzymatic reactions: effect of phosphate on alkaline phosphatase 164 Ⅲ. Effects of pH value on the velocities of enzymatic reactions 165 Ⅳ. Effects of temperature on the velocities of 　　 enzymatic reactions 167 附錄 169 附錄一生物化學常用緩衝液的配製方法 169 附錄二分子生物學常用試劑、緩衝液的配製方法 175 附錄三實驗室中常用酸堿的相對密度和濃度 181 附錄四部分生化與分子生物學實驗儀器的操作規程 181 附錄五常用生化與分子生物學實驗儀器的使用注意事項 183 參考文獻 189